可能是表达的问题。在表达你目的蛋白的同时有很多杂蛋白被同时表达了。你可以增加前面洗脱的步骤，尽可能多的将杂蛋白洗脱掉。
应该是没洗干净。上样后用上样缓冲液洗，然后用低浓度咪唑洗，最后再洗脱样品。至于具体浓度，要做预实验确定。
