反应原理是：碱性环境中，Cu2+可与肽键形成紫色的螯合物，双缩脲试剂是与肽键反应。
高温处理的蛋清溶液与双缩脲试剂反应会产生紫色反应，高温处理的蛋清溶液中仍有肽键
胃液处理过的蛋白质溶液与双缩脲试剂也可产生紫色反应，胃液中含有蛋白酶，只能将蛋白质水解为短肽，所以胃液处理过的蛋白质溶液也有肽键
高温处理蛋清以后把蛋白质变性失去了活性，但是只是破坏了它的空间结构而已，并没有破坏肽链中的肽键。而双缩脲试剂起作用在于蛋清中存在肽键，所以高温后还是可以显色的
双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物，将尿素加热到180度，则两分子尿素缩合成一分子双缩脲，并放出一分子氨。双缩脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应产生红紫色络合物，此反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中含有很多和双缩脲结构相似的肽键，因此也能起双缩脲反应，形成红紫色络合物。
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